style="width:10.10001in;height:3.24654in" /> 本文是学习GB-T 27520-2011 暗纹东方鲀. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准给出了暗纹东方鲀(Takifugu
fasciatus)的主要形态结构特征、生长与繁殖、生化遗传特性
和检测方法。
本标准适用于暗纹东方鲀的种质检测与鉴定。
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件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T 18654.1 养殖鱼类种质检验 第1部分：检验规则
GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法
GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分：性状测定
GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析
暗纹东方鲀 Takifugu fasciatus(McClland,1844)。
鲀形目(Tetraodontiformes),鲀科(Tetraodontidae),东方鲀属(Takifugu)。
体呈亚圆筒形，前端钝圆，向后渐狭小，尾柄略为侧扁。胸鳍宽短，无腹鳍，背鳍后位，与臀鳍相对，
同形，尾鳍后缘稍圆形。口小，端位。体棕褐色，体侧下方具淡黄色带，腹面白色。体色和条纹随体长不
同而有变异。背部具不明显暗褐色横纹4条～6条，横纹之间具白色狭纹3条～5条。胸鳍后上方体侧
处具1圆形黑色大斑，边缘白色。背鳍基部具1长圆形黑色大斑。胸鳍基底外侧和里侧常各具1黑斑。
胸鳍、背鳍、臀鳍黄棕色，尾鳍后端灰褐色。头部及体背、腹面均被小刺，背刺区与腹刺区在眼后部相连。
吻侧、鳃孔后部体侧及尾柄光滑无刺。暗纹东方鲀的外形见图1。
GB/T 27520—2011
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图 1 暗纹东方鲀外形
4.2.1 背鳍鳍式：D. 15～18。
4.2.2 臀鳍鳍式：A. 13～16。
4.2.3 胸鳍鳍式：P. 16～18。
暗纹东方鲀可量性状比例值见表1。
表 1 暗纹东方鲀可量性状比例值
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颌与齿愈合，上、下各1对板状齿。
脊椎骨数目为：21块～24块。
体长与体重关系参见附录 A。
雌鱼性成熟年龄3龄～4龄，雄鱼性成熟年龄2龄～3龄。
style="width:9.20667in;height:4.1866in" />GB/T 27520—2011
暗纹东方鲀为一次产卵型鱼类。绝对怀卵量1.0×10⁵粒～5.0×10⁵粒。长江中下游地区产卵期
在4月上旬至6月下旬，5月为盛期。
粘性卵，淡黄色，半透明，圆球形，卵径0.9 mm～1.1mm,
卵膜厚，有弹性，具油球，附着在基质上。
体细胞染色体数为：2n=44。 核型公式：10 m+6 sm+8 st+20
t。染色体组型见图2。
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图 2 暗纹东方鲀染色体组型
肌肉组织乳酸脱氢酶(LDH) 同工酶电泳图谱见图3。
十
图 3 暗纹东方鲀肌肉乳酸脱氢酶(LDH)
同工酶电泳图谱及扫描图
GB/T 27520—2011
按GB/T 18654.2 的规定执行。
采用脊椎骨年龄鉴定法和鳃盖骨年龄鉴定法。
7.2.1.1 取 材
取靠近头部的脊椎骨5块左右。
7.2.1.2 处理与观察
处理与观察步骤如下：
a) 将去肉脊椎骨置于水中煮沸5 min;
b) 剔弃脊椎骨附着的脂肪和杂物；
c) 3% 氢氧化钾(KOH) 溶液浸泡48 h;
d) 水洗烘干；
e) 用解剖镜观察锥体中央斜凹面上的轮纹，以此确定鱼的年龄。
7.2.2.1 取材
取出新鲜鱼体。
7.2.2.2 处理与观察
处理与观察步骤如下：
a) 用开水烫1次～2次；
b) 洗净、去除附着物；
c) 浸于甘油中10 min～15 min,然后加热到甘油沸点，骨片即变成乳白色；
d) 用解剖镜观察白色宽层与暗黑色窄层组成的年轮，以此确定鱼的年龄。
按GB/T 18654.3 的规定执行。
按 GB/T 18654.12 的规定执行。
取活体暗纹东方鲀背部肌肉1 g,用0.7%生理盐水清洗，加入3%的辅酶 I(NAD)
溶液3 mL, 置
GB/T 27520—2011
匀浆器中匀浆，将匀浆液于4℃、12000 r/min 离心30
min,取上清液，重复以上离心过程至上清液
澄清。
将混匀的4%聚丙烯酰胺凝胶配方溶液，立即灌注到凝胶模具中，聚合反应结束后，取出凝胶，放在
保湿盒内备用。4%聚丙烯酰胺凝胶配方溶液及其制备见附录 B 中的 B.1。
电极缓冲液为 TC 电极缓冲液，配制方法见附录 B 中 的 B.2。
预电泳：将预先制备的聚丙烯酰胺凝胶放在冷却板上，在50 mA 电流下，电泳30
min。
前电泳：预电泳结束后，用微量加样器在凝胶的点样槽中加入8 μL
的样品，在25 mA 电流下，
电泳10 min。
正式电泳：在电压275 V 下连续电泳2 h。
电泳结束后，取出聚丙烯酰胺凝胶，放入预先配好并在37℃恒温箱中保温的染色液中染色。乳酸
脱氢酶(LDH) 同工酶的染色液配制见附录B 中的B.3。
按 GB/T 18654.1 的规定执行。
GB/T 27520—2011
(资料性附录)
养殖暗纹东方鲀体长与体重关系
体长与体重关系见式(A. 1):
W=0.0436L2.9516(R²=0.9456) … … … … … … … … … …(A. 1)
式中：
W— 鱼体体重，单位为克(g);
L ——鱼体体长，单位为厘米(cm)。
GB/T 27520—2011
(规范性附录)
乳酸脱氢酶(LDH) 同工酶电泳分析溶液制备
B.1 聚丙烯酰胺凝胶
B.1.1 各种凝胶溶液配方
各种凝胶溶液配方见表B.1。
表 B.1 各种凝胶溶液配方
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| 25% TEMED |
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| 10% APS |
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B.1.2 4% 聚丙烯酰胺凝胶配方
4%聚丙烯酰胺凝胶配方见表 B.2。
表 B.2 4% 聚丙烯酰胺凝胶配方
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| 25% TEMED |
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| 10% APS |
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B.2 电极缓冲液
电极缓冲液配方见表 B.3。
表 B.3 电极缓冲液配方
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GB/T 27520—2011
B.3 乳酸脱氢酶(LDH) 同工酶染色液
B.3.1 各种溶液配方
各种溶液配方见表 B.4。
表 B.4 各种溶液配方
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| 1 mol/L乳酸钠 |
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B.3.2 乳酸脱氢酶(LDH) 同工酶染色液配方
乳酸脱氢酶(LDH) 同工酶染色液制备见表 B.5。
表 B.5 乳酸脱氢酶(LDH) 同工酶的染色液配方
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15 mL |
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30 mL |
| 1 mol/L乳酸钠 | 10 mL |
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95 mL |
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30 mg |
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10.5 mg |
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